上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科团队联合Micro & Nano公司，在药物递送领域顶刊Journal of Controlled Release（一区TOP，IF = 12.4）发表《Dilution mode acts as a critical process parameter that reprograms lipid nanoparticle assembly and in vivo mRNA delivery》。研究把下游稀释环节重新定义为关键工艺参数，并用锐视科技IMAGING 200小动物活体成像系统揭示其对体内递送的支配作用。
mRNA脂质纳米粒（LNP）的制备以微流控混合为核心，而混合之后的稀释步骤长期被视为被动收尾。研究在9组流速（FR）、流速比（FRR）与稀释比（DR）条件下比较离线稀释（OD）与在线稀释（ID）：ID粒径更小、包封率更低、表面电荷更负，主导参数也由OD的FRR变为ID的DR。ID在肝细胞与成肌细胞中转染更强、肌注后肝表达更高，OD则激发更强的抗原特异性IFN-γ应答。
LNP以SM-102、DSPC、胆固醇与mPEG-DMG（50∶10∶38.5∶1.5）经微流控设备（Micro & Nano）制备，OD组静置30 min后离线稀释，ID组在芯片内即时稀释，并以DLS、冷冻电镜与RiboGreen法表征粒径、形貌与包封率。随后在小鼠双侧胫骨前肌注射荧光素酶mRNA（0.25 mg/kg），6 h与24 h后腹腔注射D-荧光素（150 mg/kg），并用锐视IMAGING 200采集并定量发光信号、计算肝/肌肉比值；另以Spike mRNA（0.5 mg/kg，第0、14天）免疫，经ELISA与IFN-γ ELISpot评价免疫应答。
同一混合参数下，ID在7/9组条件中粒径更小（剔除P7后91.1 vs 115.7 nm，−19.8%），包封率63.3%，低于OD的83.3%，Zeta电位负向偏移58.3%；更换ALC-0315、Lipid-5后趋势一致，说明这是在线稀释的普适效应。4 ℃储存14天后，OD包封率升11.5%、ID降7.3%，印证两者颗粒结构确有差异。
锐视科技IMAGING 200的6 h/24 h成像把差异直接呈现：ID2、ID8注射部位信号更强，ID2、ID3、ID8肝脏信号明显升高，ID9肝/肌肉比值最高；整体ID肝脏表达提高118.1%、肝/肌肉比值提高87.7%（p < 0.05），肌肉局部表达却与OD相当，说明更多mRNA迁移至肝脏。
细胞层面，ID在AML12与C2C12中表达提升1.9倍与3.0倍；免疫层面，OD组IFN-γ斑点数为ID组的2.1倍，且与粒径正相关（R² = 0.57），第28天OD9组IgG达151,060 ng/mL，远高于ID9组的57,920 ng/mL。
图2 OD与ID制备的mRNA/LNP在体外与体内的表达差异
（A–C）三株细胞荧光素酶表达统计。（D、E）锐视科技IMAGING 200采集的6 h/24 h活体荧光成像。（F–H）肌肉、肝脏信号定量及肝/肌肉比值。
稀释方式并非被动收尾，而是能独立改写LNP组装与体内命运的工艺参数。二者各有取舍：OD更适合需要强细胞免疫的场景（如肿瘤疫苗），ID更契合肝靶向的蛋白替代与基因编辑。这为mRNA药物的QbD工艺开发与技术转移补上关键一环。
https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2026.115365
锐视科技IMAGING 200小动物活体成像系统
